T7 RNA polimeraz

Çift iplikli bir DNA kalıptan (turuncu) mRNA (yeşil) üreten bir T7 RNA Polimeraz (mavi).

T7 RNA Polymeraz T7 bakteriyofaja ait bir RNA polimerazdır. Bu enzim, faj genlerindeki genetik bilginin mesajcı RNA molekülü şeklinde transkripsiyonunu katalizler.

Etkinlik

T7 RNA polimeraz sadece T7 promotörünün akış aşağısının transkripsiyonunu yapar. RNA oluşturmak için T7 polimerazının bir DNA kalıba, ayrıca kofaktör olarak Mg2+ iyonuna gereği vardır. RNA'yı 5'→ 3' yönünde oluşturur. Hata oranı çok düşüktür. Moleküler ağırlığı 99 kDa'dır.[1]

Nükleaz etkinliği

T7 RNA polimeraz, polimeraz özelliğinin yanı sıra tek iplikli DNA ve RNA üzerinde eksonükleaz etkinliğine de sahiptir. Bu etkinlik çift iplikli DNA üzerinde bir promotörden başlamış polimerizasyon sırasında görünmez ama transkripsiyonun durdurulması halinde nükleaz etkinliği gözlemlenebilir. Nükleaz etkinliği sonucu geriye 3′-OH uç kalacak şekilde bir veya iki nükleotitlik parçalar nükleik asidin 3' ucundan kırpılır. rNTP moleküllerinin varlığında bu nükleaz etkinliği maskelenir ve yerine polimeraz aktivitesi gelir.[2]

İlişkili proteinler

Aynı evrimsel aileye ait ilişkili proteinler arasında T3 ve SP6 RNA polimerazları ve mitokondrial RNA polimerazlar sayılabilir.[3] T7 RNA polimeraz ailesi, yapısal ve evrimsel olarak çok altbirimli RNA polimerazlar ailesinden (bakteriyel ve ökaryotik RNA polimeraz alt-birimleri de dahil olmak üzere) farklıdır. Bakteriyel RNA polimerazlara tezat olarak, T7 polimeraz rifampisin antibiyotiği tarafından inhibe olmaz. Buna rağmen, bu enzim ile daha kompleks yapılı diğer RNA polimerazlar pek çok ortak özelliklere sahiptir.[4]

Uygulama

Biyoteknoloji uygulamalarında, T7 RNA polimeraz vektör içine klonlanmış DNA'nın transkripsiyonu için kullanılır. Bu vektörlerde genelde birbirine ters yönde iki farklı faj promotörü bulunur (örneğin T7 ve T3, veya T7 ve Sp6). Böylece farklı polimerazlar kullanılarak vektöre sokulmuş DNA'nın iki ipliğinden de RNA elde edilebilir. BSA veya spermidin kullanılması enzimin aktivitesini artırır. Bu sistem ile homojen işaretlenmiş tek iplikli RNA elde edilebilir.[5]

Kaynaklar

  1. ↑ McAllister WT (1993). "Structure and function of the bacteriophage T7 RNA polymerase (or, the virtues of simplicity)". Cell. Mol. Biol. Res. 39 (4): 385–91. PMID 8312975.
  2. ↑ Sastry SS, Ross BM (March 1997). "Nuclease activity of T7 RNA polymerase and the heterogeneity of transcription elongation complexes". J. Biol. Chem. 272 (13): 8644–52. DOI:10.1074/jbc.272.13.8644. PMID 9079696. http://www.jbc.org/cgi/pmidlookup?view=long&pmid=9079696.
  3. ↑ Sousa R, Mukherjee S (2003). "T7 RNA polymerase". Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol. 73: 1–41. DOI:10.1016/S0079-6603(03)01001-8. PMID 12882513.
  4. ↑ Martin CT, Esposito EA, Theis K, Gong P (2005). "Structure and function in promoter escape by T7 RNA polymerase". Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol. 80: 323–47. DOI:10.1016/S0079-6603(05)80008-X. PMID 16164978.
  5. ↑ [www.roche-applied-science.com/pack-insert/0881767a.pdf "T7 RNA Polymerase"]. www.roche-applied-science.com/pack-insert/0881767a.pdf. Erişim tarihi: 2011-02-18.

Dış bağlantılar

This article is issued from Vikipedi - version of the 7/3/2016. The text is available under the Creative Commons Attribution/Share Alike but additional terms may apply for the media files.